Об участии ФГБУ «ВНИИКР» в заседании экспертной группы Европейской и Средиземноморской организации по карантину и защите растений (ЕОКЗР) по бактериологии

Заместитель начальника Испытательного экспертного центра
(ИЭЦ) ФГБУ «ВНИИКР» — научно-практического центра Россельхознадзора в сфере
карантина и защиты растений К.П. Корнев принял участие в 19-ом заседании группы
экспертов ЕОКЗР по бактериологии, которое прошло на базе Министерства Сельского
хозяйства в Копенгагене (Дания).

Программа заседания состояла из нескольких сессий:

• Отчет о предыдущих совещаниях, организуемых секретариатом
  ЕОКЗР. Обсуждение общих вопросов;
• Обсуждение прогресса в разработке диагностических протоколов
  МККЗР;
• Разработка диагностических протоколов ЕОКЗР;
• Встреча Европейской ассоциации фитобактериологов.

В рамках первой сессии секретариатом ЕОКЗР представлена информация
для специалистов-бактериологов, доложены основные выдержки следующих
заседаний: 18^го совещания группы экспертов по бактериологии, 5^го совещания группы
экспертов по диагностике и обеспечению качества, 3^его рабочего совещания для
заведующих лабораториями, результаты международного проекта Q-collectи т.д.

Также обсуждался вопрос включения коммерческих тест-систем в
диагностические протоколы ЕОКЗР при отсутствии данных по оценке их пригодности
и взаимодействия с частными лабораториями при создании новых диагностических
протоколов. Участниками было принято решение не включать в будущие протоколы
коммерческие тест-системы без наличия минимальных данных об оценке их
пригодности (валидации). По этому вопросу было решено дополнить руководство для
авторов диагностических протоколов, добавив в него упомянутые выше требования.

При обсуждении второго вопроса, секретариат ЕОКЗР отметил,
что на текущий момент со стороны сторонних организаций в секретариат не
поступило ни одного предложения о сотрудничестве. Участниками встречи было
отмечено, что участие специалистов в обсуждении технических вопросов могло бы
быть полезным при создании протоколов, в то время как в настоящий момент
частные компании/лаборатории имеют возможность комментировать лишь итоговый
вариант протокола.

В ходе второй сессии обсуждался прогресс в разработке диагностических
протоколов МККЗР (IPPC) по Xanthomonas fragariae, Erwinia amylovora и ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’,
Liberibacter spp.

Текущие версии диагностического стандарта МККЗР и ЕОКЗР для Xanthomonas fragariae имеют
некоторые различия. Комментарии, касающиеся протокола МККЗР были получены
только от Нидерландов и Португальской республики, в связи с чем секретариат ЕОКЗР
призвал экспертов активнее участвовать в обсуждении протокола, в целях снижения
расхождений итоговой версии со стандартом ЕОКЗР. Другие страны согласились с
предоставленной версией протокола, в тоже время участники встречи отметили, что
в стандартах МККЗР разница между пробоподготовкой образцов с симптомами и
бессимптомным материалом четко не прописана. По итогам обсуждение принято решение
создать группу экспертов из 4-5 человек для подготовки совместных комментариев по
диагностическому стандарту.

Секретариат ЕОКЗР информировал о прогрессе в подготовке
диагностических протоколов по Erwinia amylovora и ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’,
Liberibacter spp., которые находятся на этапе консультации среди экспертов. Было
предложено внести специфический ПЦР-РВ тест для выявления ‘Candidatus Liberibacter solanacearum’,
описанный в протоколе ЕОКЗР в протокол МККЗР, как активно использующийся в
диагностических лабораториях Европейских стран. Для данного теста проведена
оценка рабочих характеристик в рамках межлабораторных сравнительных испытаний (МСИ)
и включение его в протокол МККЗР является необходимым.

Третья сессия была посвящена разработке диагностических
протоколов ЕОКЗР. Эксперты признали новый протокол для вида Xanthomonas axonopodis pv.
аllii и пересмотренный для вида Pantoea stewartii subsp. stewartii (PM 7/60)
готовыми для обсуждения на уровне НОКЗР.

Прошло также обсуждение комментариев,полученных по
диагностическому стандарту Clavibactermichiganensissubsp.мichiganensis, они
признаны экспертами незначительными, изменения были внесены.

Английским специалистом была представлена новая версия
диагностического стандарта возбудителя бурой гнили картофеля Ralstonia solanacearum.
Эксперты согласились с новой версией и в тоже время предложили добавить данные
по валидации теста для различных субстратов.

Достаточно большая часть времени была посвящена вопросу
возбудителя бактериоза винограда Xylella fastidiosa (болезнь Пирса) и
возбудителю бактериальной пятнистости тыквенных культур Acidovorax citrulli.

Для обсуждения диагностического протокола возбудителя бактериоза
винограда Xylella fastidiosa секретариатом ЕОКЗР была выделена специальная
сессия. Представителями некоторых стран (Англия, Италия, Франция, Словения,
Австрия, Германия, Голландия) были представлены доклады о мониторинговых
обследованиях на выявление Xylella fastidiosa, симптомах и особенностях
лабораторной диагностики. Прошло обсуждение ситуации с интродукцией и
диагностикой возбудителя в каждой из стран участников встречи. Отмечено, что несмотря
на сравнительно доступные методы выявления существует проблема с определением объема
образца для анализа и временем его отбора, а также выделением возбудителя в чистую
культуру, для решения которой многие страны участвуют в научных проектах, посвященных
целиком возбудителю болезни Пирса. Итальянскими специалистами Университета Бари
представлены результаты, полученные в рамках программы регионального
мониторинга патогена при помощи следующих методов: ИФА, DTBIA, Классический
ПЦР, ПЦР-РВ, LAMP. Было проанализировано 65000 образцов, 90 % которых
представляли образцы оливковых деревьев. Представлены данные по валидации
Иммуноферментного анализа, который показывал стабильную повторяемость, но
оказался достаточно трудоемким. LAMP анализ показал хорошие результаты при
диагностике насекомых-переносчиков болезни.Проведено сравнение данных с
Мультиплексной ПЦР-РВ. По результатам сессии секретариатом ЕОКЗР предложено
пересмотреть текущую версию стандарта, т.к. она датируется 2004 годом, с целью
включения современных тестов. Для подготовки новой версии было предложено
создать группу экспертов, которые будут работать отдаленно. Запланировано
проведение рабочей встречи для подготовки обобщенной версии.

Обсуждение нового диагностического протокола для вида Acidovorax citrulli,
подготовленного Голландскими специалистами, предваряла краткая справка ЕОКЗР
касающаяся распространения и значимости возбудителя бактериальной пятнистости
тыквенных культур. Отмечено, что в последнее время две вспышки заболевания наблюдались
в Сербии и одна на о. Гваделупа (Франция), заболевание
также отмечалось на территории Израильского государства на дыне. Подготовка
протокола была начата в то время, когда возбудитель находился в списке
отсутствующих для региона ЕОКЗР и за время подготовки его переместили в список
ограниченно распространенных объектов. Касаемо диагностического стандарта
экспертами было выражено сомнение по поводу применения некоторых
диагностических тестов, представленных в нем, т.к. они разработаны частными
компаниями (например, Монсанта и Сингента). Однако секретариат ЕОКЗР привел разъяснение,
что предоставленные данные прошли оценку применимости в рамках проекта TESTAFP
7, касающегося разработки методов оздоровления семян и могут быть использованы,
так как являются опубликованными. Первая версия диагностического стандарта была
одобрена экспертами, принято решение внести небольшие правки и представить диагностический
стандарт на обсуждение НОКЗР.

Завершала встречу серия докладов ученых Европейской
ассоциации фитобактериологов на актуальные темы, такие как Rosa sp. новое
растение-хозяин Ralstonia solanacearum.

В связи с большим количеством диагностических стандартов,
требующих доработки и пересмотра, эксперты пришли к единому мнению о
необходимости проведения следующего заседания ранее запланированного срока, а
именно в июне 2016 года.

Специалисты ФГБУ «ВНИИКР» планируют в 2016 году продолжить
свою активную работу во всех международных проектах, направленных на
обеспечение мировой агробезопасности в сфере карантина и защиты растений.