О разработке молекулярно-генетических методов диагностики фитоплазм на базе ФГБУ «ВНИИКР»

В научно-экспериментальном отделе ФГБУ «ВНИИКР» проводится научно-исследовательская
работа по изучению фитоплазм. Фитоплазмы — особо опасные
фитопатогены, вызывающие заболевания сельскохозяйственных культур, к которым
относятся: возбудитель золотистого пожелтения винограда Candidatus Phytoplasma
vitis (Flavescence doree) — карантинный вредный организм, отсутствующий на
территории РФ, возбудители почернения коры винограда Candidatus Phytoplasma
solani (Bois noir), пролиферации яблони Candidatus Phytoplasma mali и истощения груши Candidatus Phytoplasma
pyri, включенные в список А2 ЕОКЗР, и возбудитель израстания малины Candidatus
Phytoplasma rubi, распространенный в средней полосе России. Для их точного
выявления и диагностики применяют молекулярно-генетические методы (ПЦР,
секвенирование).

По результатам работы, проведенной младшим научным
сотрудником Г.Н. Матяшовой, были оптимизированы методы выделения ДНК фитоплазм
из растительного материала, позволяющие выявлять фитопатоген в низких
концентрациях. Усовершенствованы методы диагностики фитоплазм, в том числе и
карантинного вида, на основе метода ПЦР и секвенирования. Подобраны ферменты
рестрикции для проведения RFLP-анализа (анализ длин рестрикционных фрагментов),
позволяющего различать группы фитоплазм и идентифицировать карантинный вид.

Установлено, что специфическую систему «BNrt» для ПЦР в
«реальном времени» возможно использовать для выявления Candidatus Phytoplasma solani, а система «FDrt»,
предложенная для карантинного вредного организма Candidatus Phytoplasma vitis,
при наличии ложноположительных результатов подходит лишь для скринингового
теста.